パルブアルブミンをYFPタグした遺伝子改変マウスの透明化脳半球
データ提供：慶応義塾大学 矢野竜太朗 氏, 田中謙二 先生
撮像協力：カールツァイスマイクロスコピー株式会社 佐藤朗氏
使用顕微鏡：ライトシート顕微鏡 Lightsheet Z.1
他組織の透明化映像をご覧いただく場合は、透明化ギャラリーにアクセスして下さい。
CLARITYとは
アクリルアミドベースのハイドロゲルを使い組織を透明化する技術です。CLARITYは脳や臓器などの組織をまるごと透明なハイブリッドゲルに変換することで可視光および蛍光マーカーのアクセスを向上します。それにより、分子ラベリングの技術と組み合わせてまるごとの臓器内のタンパク質や核酸の分布を高精度にイメージングすることが可能です。この新技術は2013年にスタンフォード大学のKwanghun Chung博士、Karl Deisseroth博士らによりNature誌に発表されました。
Smart-Clearのクオリティ
マウス全脳を透明化
マウス全脳
透明化した全脳
YFPイメージング
Easy-Clearで処理することで脂質成分を除去し、スライスや全組織でも素早く透明にします。蛍光標識した組織にも適用できます。
3Dイメージングの取得
GFP (前標識)
Anti-GFP (後標識)
マージ
蛍光標識した組織はもちろん、抗体染色による後標識でも力を発揮します。
脳以外も透明化
心臓
腸
腎臓
肝臓
肺
あらゆる組織でも透明にできます！
ラージチャンバー対応で複数の組織を同時に透明化
マウス全脳用4連ホルダー
スライス用10連ホルダー
ラット全脳用2連ホルダー(シリンダー)
スフェロイド用18ポケットホルダー
ラット全脳用2連ホルダー(カップ)
- マウス4組織を同時に処理可能
- ラット2組織を同時に処理可能
- 1-2mmのスライスなら10枚同時処理
- スフェロイドにも対応
SmartClearⅡ Pro 組織透明化装置
- 電気分解で起こる「熱」「pHの低下」を低減し、蛍光タンパク質の消光を抑制
- 電極と組織の間に半透膜を設置、電気分解で起こるカーボン付着を防止
- 回転式チャンバーで組織をムラなく透明化
- SDS電気泳動に必要な電圧を広範囲に制御、様々なサンプルを透明に！
- Proceeding of the National Academy of Scienceに掲載
3Dイメージの撮像
データ提供：慶応義塾大学 矢野竜太朗氏、田中謙二先生
撮影協力：カールツァイスマイクロスコピー株式会社 佐藤朗氏
使用顕微鏡：ライトシート顕微鏡 Lightsheet Z.1
| 電圧レンジ | DC 0 ~ 90 V |
|---|---|
| 電流レンジ | 0 ~ 1.5 A |
| サンプルの回転速度 | 0 ~ 10 rpm |
| リザーバ― | バッファーA, B : 500 mL |
| 外形寸法 (W x D x H, mm) *SmartClear II モジュール 外形寸法 (W x D x H, mm) *SmartBox モジュール |
366 x 375 x 410 210 x 375 x 265 |
| 温度制御レンジ | 室温 ~ 50℃ |
SmartClear II Pro ラージチャンバー対応高速組織透明化システム
※システムの販売は終了しました。後継のSmartBatch+をご検討ください。
| 型式 | 品名 |
|---|---|
| STM-SC2P | ※販売終了 |
| SC-2P01 | ※販売終了 |
| SB-2001 | ※販売終了 |
| SC-BK023 | ※販売終了 後継：SC-CK-40 Clear+キット |
| SB-L2P10 | 多目的サンプルホルダーセット |
| SB-L2P11 | ウィンドウスペーサーType-P (3mm) |
| SB-L2P12 | サンプルホルダーセット Type-Rat (ラット脳2個対応) |
| SB-L2P13 | マルチパンチサンプルホルダー (18ホール) |
| SB-L2P14 | サンプルホルダーType-B |
| SB-L2P15 | サンプルホルダー1式(SC-L2P11,SC-L2P12,SC-L2P13,Sc-L2P14) |
| SB-L2P20 | ウィンドウスペーサーType-P |
| SC-MS | スモールメッシュバッグ10個入り |
| SC-ML | ラージメッシュバッグ6個入り |
| SC-CK-40 | Clear+キット（SmartClear用、脱脂ﾊﾞｯﾌｧ、導電ﾊﾞｯﾌｧ、半透膜） |
国内論文実績：
Hideya Sakaguchi, Yuki Ozaki, Tomoka Ashida, Takayoshi Matsubara, Naotaka Oishi, Shunsuke Kihara, Jun Takahashi. Self-Organized Synchronous Calcium Transients in a Cultured Human Neural Network Derived from Cerebral Organoids. Stem Cell Reports. 2019.
(米国ソーク研究所 Gage Lab 坂口 秀哉 先生)
オリジナルCLARITYの問題点
組織へのダメージ
・ 強い電気化学反応により重要な生物組織サンプルが損傷するリスクがある
・ SDSの電気分解によりpHが下がり、蛍光タンパク質のクエンチング（消光）が起こる
・ 電極付近で発生するカーボンが組織表面に吸着して黒くなり、イメージングの妨げになる
・ 1方向の電気泳動では電場にムラができ、組織が部分的に透明化されないなどのことが起こる
・ 熱により蛍光タンパク質のシグナルのロスが起こる
コスト
・ 高価な高濃度SDSバッファを大量に使う必要がある
・ pH低下およびカーボン発生のためにSDSバッファを頻繁に交換する必要がある
スピード
・ 組織へのダメージを回避するために低電圧を使わざるを得ず、クリーニングに時間がかかる
CLARITY用 SDSバッファー
サンプルSDSバッファA、電極SDSバッファB
SmartClear II用に調製されたSDSバッファーです。一度の使用に5-10サンプルまで可能です。非常にコストパフォーマンスに優れたバッファーです。
EasyIndex 屈折率調整透明化試薬
サンプルから脂質を除去した段階では屈折率のミスマッチにより完全に透明ではありません。Easy-Indexに浸すことで屈折率を均一にし、サンプルをより透明にしてイメージングに最適な状態にします。
- 浸けたままイメージング
- CLARITYサンプルの屈折率調整に最適
- CLARITY用レンズに使用可能
- 無害
CLARITYステップ
1、ハイドロゲルモノマーの浸透、およびハイドロゲルの組織重合
EasyGel
ハイドロゲル
(1)EasyGelハイドロゲル重合システム
処理時間：1-2日
2、SDS溶液中での電気泳動により組織の脂質を除去
SmartClear II
SDSミセルと一緒に脂質を除去
(2)SmartClearII高速組織透明化システム
処理時間：1-3日
3、分子ラベリング
組織まるごと染色
顕微鏡観察
脱色剤で脱色
4、3次元イメージング
Easy-Index
EasyClear
EasyGel
(3)免疫染色ステップ(EastClearまたはEasyGel)
処理時間：2-4週間
| 型式 | 品名 |
|---|---|
| EI-Z1001 | Easy-Index 屈折率調整透明化試薬 (500 mL) |
| EI-Z1011 | Easy-Index 屈折率調整透明化試薬 (100 mL) |